Hotstart Taq DNA Polimerase
Hot Start Taq DNA Polimerase (Teenliggaam modifikasie) is 'n warmstart termostabiele DNA polimerase van Thermus aquaticus YT-1, wat 'n 5'→3' polimerase aktiwiteit en 'n 5' flap endonuklease aktiwiteit besit.Die warmbegin Taq DNA-polimerase is 'n Taq DNA-polimerase wat deur termolabiele Taq-teenliggaampies gemodifiseer is.Teenliggaammodifikasie het spesifisiteit, sensitiwiteit en opbrengs van PCR verhoog.
Komponente
| Komponent | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq-buffer | 4×1 ml | 4×10 ml | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polimerase (teenliggaam gemodifiseerde) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10×5 ml |
Aansoeke
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 by 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 en 50% Glycerol.
Berging Toestand
Vervoer onder 0°C en word gestoor by -25°C~-15°C.
Eenheid Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat 15 nmol dNTP binne 30 minute by 75°C in suur onoplosbare materiaal inkorporeer.
Kwaliteitsbeheer
1.Endonuclease Aktiwiteit:Inkubasie van 20 U ensiem met 4 μg pUC19 DNA vir 4 uur by 37℃ het gelei tot geen waarneembare degradasie van die DNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
2.5 kb Lambda PCR:25 siklusse van PCR amplifikasie van 5 ng Lambda DNA met 1.25 eenhede Taq DNA Polimerase in die teenwoordigheid van 200 µM dNTP's en 0.2 µM primers lei tot die verwagte 5 kb produk.
3.Eksonuklease-aktiwiteit:Inkubasie van 'n 50 µl reaksie wat 'n minimum van 12.5 U Taq DNA Polimerase bevat met 10 nmol 5´-FAM oligonukleotied vir 30 minute by 37 ℃ lewer geen waarneembare degradasie nie.
4.RNase-aktiwiteit:Inkubasie van 10 µL reaksie wat 20 U ensiem bevat met 1μg RNA-transkripsies vir 2 uur by 37°C het gelei tot geen waarneembare degradasie van die RNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
5.Hitte inaktivering:Geen.
Reaksiestelsel
| Komponente | Volume |
| Sjabloon DNAa | opsioneel |
| 10 μM Voorwaartse onderlaag | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| dNTP-mengsel (10 mM elk) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq-buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polimeraseb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Nuklease-vrye water | Tot 25 μL |
Notas:
1) a.
| DNA | Bedrag |
| Genomies | 1 ng-1 μg |
| Plasmied of viraal | 1 bl-1 ng |
2) b.Die optimale konsentrasie van Taq DNA Polimerase kan wissel van 5-50 eenhede/ml (0.1-0.5 eenhede/25 µL reaksie) in gespesialiseerde toepassings.
Termiese fietsry protokol
PCR
| Stap | Temperatuur(°C) | Tyd | Siklusse |
| Aanvanklike denaturasiea | 95 ℃ | 1-3 minute | - |
| Denaturasie | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 siklusse |
| Uitgloeiingb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Uitbreiding | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Finale Uitbreiding | 68 ℃ | 5 min | - |
Notas:
1) 'n Aanvanklike denaturering van 1 min by 95°C is voldoende vir die meeste amplifikasies.Vir moeilike sjablone word 'n langer denaturering van 2-3 minute by 95°C aanbeveel.Met kolonie PCR word 'n aanvanklike 5 minute denaturering by 95°C aanbeveel.
2) Die uitgloeistap is tipies 15-60 s.Uitgloeiingstemperatuur is gebaseer op die Tm van die onderlaagpaar en is tipies 45-68℃.
