RNAse inhibeerder
Muriene RNase inhibeerder is 'n rekombinante muriene RNase inhibeerder wat uitgedruk en gesuiwer word vanaf E.coli.Dit bind aan RNase A, B of C in 'n 1:1-verhouding deur nie-kovalente binding, wat die aktiwiteit van die drie ensieme inhibeer en RNA teen afbraak beskerm.Dit is egter nie effektief teen RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H of RNase van Aspergillus nie.Muriene RNase-inhibeerder is getoets deur RT-PCR, RT-qPCR en IVT mRNA, en was verenigbaar met verskeie kommersiële Omgekeerde transkriptases, DNA-polimerases en RNA-polimerases.
In vergelyking met menslike RNase inhibeerders, bevat muriene RNase inhibeerder nie twee sisteiene wat hoogs sensitief is vir oksidasie wat inaktivering van die inhibeerder veroorsaak nie.Dit maak dit stabiel teen lae konsentrasies DTT (minder as 1 mM).Hierdie kenmerk maak dit geskik vir gebruik in reaksies waar hoë konsentrasies DTT nadelig is vir die reaksie (bv. Real-time RT-PCR).
Atoepassing
Hierdie produk kan wyd gebruik word in enige eksperiment waar RNase-interferensie moontlik is om RNA-afbraak te vermy, soos:
1.Sintese van die eerste string van cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, ens.
2.Beskerm RNA teen afbraak tydens in vitro transkripsie/translasie (bv. in vitro virale replikasiestelsel).
3.Inhibisie van RNase-aktiwiteit tydens RNA-skeiding en suiwering.
Bergingsvoorwaardes
Die produk kan gestoor word by -25～- 15 ℃, geldig vir 2 jaar.
Berging buffer
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT en 50% gliserol.
Eenheid definisie
Die hoeveelheid muriene RNase-inhibeerder wat nodig is om die aktiwiteit van 5ng ribonuklease A met 50% te inhibeer, is gedefinieer as een eenheid (U).
Molekulêre gewig van proteïen
Die molekulêre gewig van muriene RNase-inhibeerder is 50 kDa.
Kwaliteitsbeheer
Eksonuklease Aktiwiteit:
40 U van muriene RNase inhibeerder met 1 μg λ -Hind III verteer DNA by 37 ℃ vir 16 uur lewer geen degradasie soos bepaal deur agarose gel elektroforese.
Endonuklease aktiwiteit:
40 U van muriene RNase inhibeerder met 1μ g λ DNA by 37 ℃ vir 16 uur lewer geen afbraak soos bepaal deur agarose gel elektroforese.
Nicking Aktiwiteit:
40U van muriene RNase-inhibeerder met 1μ g pBR322 by 37℃ vir 16 uur lewer geen degradasie soos bepaal deur agarosegelelektroforese nie.
RNase Aktiwiteit:
40U van muriene RNase inhibeerder met 1.6μ g MS2 RNA vir 4 uur by 37 ℃ lewer geen degradasie soos bepaal deur agarose gel elektroforese.
E.coli DNA:
40 U van muriene RNase inhibeerder word gekeur vir die teenwoordigheid van E. coli genomiese DNA met behulp van TaqMan qPCR met primers spesifiek vir die E. coli 16S rRNA lokus.Die E. coli genomiese DNS-kontaminasie is ≤ 0.1 pg/40 U.
Nopmerkings
1. Gewelddadige ossillasie of roering sal lei tot ensiem inaktivering.
2. Die optimum temperatuurreeks van hierdie die inhibeerder was 25-55 ℃, en dit was geïnaktiveer by 65 ℃ en hoër.
3.Die aktiwiteite van RNase H, RNase 1 en RNase T1 is nie deur muriene RNase-inhibeerder geïnhibeer nie.
4.Die inhibisie van RNase-aktiwiteit is gevind in 'n wye reeks pH (pH 5-9 was almal aktief), en die hoogste aktiwiteit is waargeneem by pH 7-8.
5.Aangesien ribonuklease tipies aktiwiteit onder denaturerende toestande behou, moet sorg gedra word om denaturerende RNase-inhibeerdermolekules wat met 'n ribonuklease gekomplekseer het, te vermy.Om die vrystelling van aktiewe ribonuklease te voorkom, moet temperature hoër as 50 °C en hoë konsentrasies ureum of ander denaturerende middels vermy word.
