Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kat nommer: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) is 'n multipleks kwantitatiewe PCR-stel gebaseer op RNA as sjabloon.In die proses van die eksperiment is omgekeerde transkripsie en kwantitatiewe PKR in dieselfde buis uitgevoer, wat die eksperimentele werking vereenvoudig het en die risiko van kontaminasie verminder het.In hierdie kit is die eerste string cDNA doeltreffend gesintetiseer deur hittebestande omgekeerde transkripsie en kwantitatief geamplifiseer deur HotStart Tag DNA Polimerase.Die kit bevat hoofsaaklik geoptimaliseerde MP-buffer, ensiememengsels, ens. Die bufferoplossing bevat reeds Mg2+en dNTP.Daarbenewens word die faktore bygevoeg wat die nie-spesifieke PCR-amplifikasie effektief kan inhibeer en die amplifikasie-doeltreffendheid van veelvuldige qPCR-reaksies kan verbeter, wat die amplifikasie-doeltreffendheid kan verseker en tot meervoudige amplifikasiereaksie kan uitvoer.Die dUTP/UDG-stelsel is bygevoeg om die risiko van aërosolbesmetting effektief te voorkom.
Komponente
1. Buffer
2. Ensiemmengsel
Spesifikasie
| Warm Begin | Ingeboude warm begin |
| Opsporingsmetode | Primer-sonde opsporing |
| PCR metode | Een stap RT-qPCR |
| Polimerase | Taq DNA-polimerase |
| Tipe monster | DNA |
Bergingsvoorwaardes
Die produk word met droë ys gestuur en kan vir 1 jaar by -25~-15℃ gestoor word.Dit moet gereeld vermy wordvries-ontdooi.Dit word aanbeveel om apart te stoor.
Instruksies
1.Reaksie Stelsel
| Komponente | Volume (μL) | Finale konsentrasie |
| 2 × MP-buffer | 12.5 | 1× |
| Ensiemmengsel | 1 | - |
| Onderlaag/sondemengsel (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Sjabloon RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | tot 25 | - |
Notas:
Maak seker dat jy goed meng voor gebruik, vermy oormatige borrels wat veroorsaak word deur hewige vibrasie.
a.Onderlaagkonsentrasie: Onderlaagmengsel insluitend multipleksonderlaag, afhangende van die situasie, kan optimale onderlaagkonsentrasie tussen 0.l en 1.0μM wees.
b.Sondekonsentrasie: Sondemengsel, insluitend multipleks-sonde-etiketteringsverskil fluoresserende groep, afhangende van die situasie, kan optimale sondekonsentrasie tussen 0.05 en 0.5μM wees.
c.Sjabloonverdunning: qPCR is hoogs sensitief en dit word aanbeveel om die sjabloon te verdun.Die kontrole Ct-waarde is geskik tussen 20 en 35.
d.Stelselvoorbereiding: Berei asseblief voor in die ultraskoon werktafel, en pipettor en reaksiebuis sonder nukleaseresidu;dit word aanbeveel om die geweerkop met filterelement te gebruik.Vermy kruiskontaminasie en aërosolkontaminasie.
2. Geoptimaliseerde fietsryProtokol
| Siklus stap | Temp. | Tyd | Siklusse |
| Omgekeerde transkripsie | 50 ℃a | 20 minute | 1 |
| Aanvanklike-denaturasie | 95℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikasie reaksie | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 sek c |
Notas:
a.Omgekeerde transkripsie: Die temperatuur kan 42°C of 50°C kies.
b.Amplifikasiereaksie: Die temperatuur word aangepas volgens die Tm-waarde van die ontwerpte primers.
c.Fluoressensieseinverkryging: Stel asseblief die eksperimentele prosedure in volgens die vereistes van die instrumenthandleiding.
Notas
Dra asseblief die nodige PBM, soos laboratoriumjas en handskoene, om jou gesondheid en veiligheid te verseker.
