Temperatuurgevoelig UNG

Temperatuurgevoelige UNG (TS-UNG) word verkry deur rekombinante uitdrukking in E. coli.Die ensiem kataliseer die vrystelling van vry uracil uit uracil-bevattende enkel- en dubbelstring DNA en is onaktief teen RNA.In vergelyking met die konvensionele UNG-ensiem van E. coli-geenoorsprong, het TS-UNG-ensiem hoër aktiwiteit by lae temperature (20℃~37℃) en is temperatuursensitief en maklik geïnaktiveer (50℃), wat die degradasie van dUTP-bevattende amplifikasie vermy. produkte by kamertemperatuur deur die oorblywende aktiwiteit wat kan oorbly na inaktivering van die konvensionele UNG-ensiem.Daarom is TS-UNG ensiem nie net geskik vir PCR kontaminasie voorkomingsreaksie nie, maar pas ook goed by die RT-PCR amplifikasieprogram en kan gebruik word in RT-PCR kontaminasie voorkomingsreaksie.

Aanbevole toepassing

Kontaminasie Voorkoming Amplifikasie

Berging Toestand

-20°C vir langtermynberging, moet goed gemeng word voor gebruik, vermy gereelde vries-ontdooiing.

Berging buffer

20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabiliseerder, 50% gliserol.

Eenheid Definisie

Die hoeveelheid ensiem wat benodig word om 1 µg enkelstring-DNS wat dU-basisse bevat in 1 uur by 37°C af te breek, is 1 eenheid van aktiwiteit (U).

Kwaliteitsbeheer

1.SDS-PAGE elektroforetiese suiwerheid groter as 98%

2.Degradasie-aktiwiteit, bondel-tot-batch beheer, stabiliteit

3.Geen eksogene nuklease aktiwiteit, geen eksogene endonuklease of eksonuklease kontaminasie.

Instruksies

Let wel: a: As dit vir qPCR/qRT-PCR gebruik word, moet die fluoresserende sonde by die reaksiestelsel gevoeg word.Gewoonlik kan 'n finale onderlaagkonsentrasie van 0,2 μM goeie resultate gee;wanneer die reaksieprestasie swak is, kan die onderlaagkonsentrasie in die reeks van 0.2-1 μM aangepas word.Gewoonlik word die sondekonsentrasie geoptimaliseer in die reeks van 0.1-0.3 μM.Konsentrasiegradiënteksperimente kan uitgevoer word om die beste kombinasie van onderlaag en sonde te vind.

Notas

1.Die optimale reaksietemperatuur van TS-UNG ensiem is relatief laag, en dit kan geoptimaliseer word in die reeks van 20 ℃ ~ 37 ℃, die dosis van ensiem en die reaksie tyd kan geoptimaliseer word in die reeks van 0.1 ~ 0.5 U, 5 ~ 10 min;en die ensiem kan geïnaktiveer word in die proses van omgekeerde transkripsie.

2.Dit is geskik vir PCR en RT-PCR om kontaminasie te voorkom.

3.Vermy gereelde vries-ontdooiing, en moenie aan groot temperatuurskommelings blootstel nie.

4.Verskillende gene wat geamplifiseer moet word het verskillende benuttingsdoeltreffendheid van dUTP en sensitiwiteit vir UNG-ensiem, dus, indien die gebruik van UNG-stelsel lei tot 'n afname in opsporingsensitiwiteit, moet die reaksiestelsel aangepas en geoptimaliseer word, indien u tegniese ondersteuning benodig, kontak asseblief ons maatskappy.