2×PCR-meestermengsel (sonder kleurstof)
PCR Master Mix is 'n soort konvensionele PCR voorafgemengde oplossing wat gereed is om te gebruik, insluitend Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 en geoptimaliseerde buffer.Tydens die reaksie kan slegs die primer en sjabloon bygevoeg word vir amplifikasie, wat die operasiestappe van die eksperiment aansienlik vereenvoudig.Hierdie produk bevat uitstekende stabiliseerders en kan vir 3 maande by 4℃ gestoor word.Die PCR-produk het 3'-dA-uitsteeksel en kan maklik in T-vektor gekloneer word.
Bergingsvoorwaardes
Die produk moet vir twee jaar by -25℃~ -15℃ gestoor word.
Spesifikasies
| Getrouheid (teen Taq) | 1× |
| Warm Begin | No |
| Oorhang | 3′-A |
| Polimerase | Taq DNA Polimerase |
| Reaksie-formaat | SuperMix of Master Mix |
| Reaksiespoed | Standaard |
| Produk Tipe | PCR Master Mix (2×) |
Instruksies
1.Reaksiestelsel
| Komponente | Grootte (μL) |
| Sjabloon DNA | Geskik |
| Onderlaag 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Onderlaag 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR Meestermengsel | 25 |
| ddH2O | Tot 50 |
2.Amplifikasieprotokol
| Fiets stappe | Temperatuur (°C) | Tyd | Siklusse |
| Pre-denaturasie | 94 ℃ | 5 min | 1 |
| Denaturasie | 94 ℃ | 30 sek | 35 |
| Uitgloeiing | 50-60 ℃ | 30 sek | |
| Uitbreiding | 72 ℃ | 30-60 sek/kb | |
| Finale Uitbreiding | 72 ℃ | 10 minute | 1 |
Notas:
1) Sjabloongebruik: 50-200 ng genomiese DNA;0.1- 10 ng plasmied DNA.
2) Mg2+konsentrasie: Hierdie produk bevat 3 mM MgCl2 wat geskik is vir die meeste PCR-reaksies.
3) Uitgloeiingstemperatuur: Verwys asseblief na die teoretiese Tm-waarde van Primers.Die uitgloeitemperatuur kan op 2-5 ℃ laer gestel word as die teoretiese waarde van die onderlaag.
4) Verlengingstyd: Vir molekulêre identifikasie word 30 sek/kb aanbeveel.Vir geenkloning, 60sek/kb word aanbeveel.
Notas
1.Vir jou veiligheid en gesondheid, dra asseblief laboratoriumjasse en weggooibare handskoene vir operasie.
2.Slegs vir navorsingsgebruik!
