DNase I (Rnase vry) (5u/ul)
Kat nommer: HC4007A
DNase I (Deoksiribonuklease I) is 'n endodeoksiribonuklease wat enkel- of dubbelstring-DNS kan verteer.Dit herken en klief fosfodiesterbindings om monodeoksinukleotiede of enkel- of dubbelstring oligodeoksinukleotiede te produseer met fosfaatgroepe by die 5'-terminaal en hidroksiel by die 3'-terminaal.Die aktiwiteit van DNase I hang af van Ca2+en kan geaktiveer word deur tweewaardige metaalione soos Mn2+en Zn2+.5 mM Ca2+beskerm die ensiem teen hidrolise.In die teenwoordigheid van Mg2+, kon die ensiem willekeurig enige plek op enige DNA-string herken en kloof.In die teenwoordigheid van mnr2+, kan die dubbele DNA-stringe gelyktydig herken en op byna dieselfde plek gekloof word om plat-end-DNA-fragmente of taai-end-DNS-fragmente te vorm met 1-2 nukleotiede wat uitsteek.
Komponente
| Naam | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-vry | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Bergingstoestande
-25 ℃ ~ -15 ℃ vir berging;Vervoer onder yspakkies.
Instruksies
1. Berei die reaksie-oplossing in die RNase-vrye buis voor volgens die verhoudings hieronder gelys:
| Komponent | Volume |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-vry (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Tot 10μL |
Let wel: ①Bereken die volume DNase I wat bygevoeg moet word gebaseer op die hoeveelheid RNA.
2. 37 ℃ vir 15 minute;
3. Voeg 0.5M EDTA by tot die finale konsentrasie van 2.5mM~5mM, en verhit by 65℃ vir 10 minute om die reaksie te stop.Die monster kan direk gebruik word vir die volgende reaksie soos omgekeerde transkripsieeksperimenteer.
Eenheid Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat 1µg pBR322 heeltemal sal afbreekDNA in 10 minute by 37℃.
Kwaliteitsbeheer
RNase:5U DNase I met 1.6µg MS2 RNA vir 4 uur by 37℃ lewer geen afbraak nie, aangesienbepaal deur agarosegelelektroforese.
Notas
1. Berei asseblief self 0.5MEDTA voor.
2. Gebruik 1U DNase I per µg RNA.As die RNA egter minder as 1 µg is, gebruik asseblief 1U DNase I.
3. Plaas asseblief die ensiem op ys tydens werking.
