Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kat nr: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG is 'n gespesialiseerde reagens wat ontwerp is vir Real Time PCR kwalitatiewe en kwantitatiewe reaksies met behulp van sonde-gebaseerde opsporing, spesifiek ontwikkel vir vriesdrogingsprosesse.Dit bevat 'n nuwe warmbegin-ensiem Hotstart Taq plus (DG), waarvan die Taq-ensiemaktiwiteit by kamertemperatuur verseël is, wat nie-spesifieke amplifikasie wat veroorsaak word deur primer nie-spesifieke uitgloeiing of primer dimeer vorming onder lae temperatuur toestande effektief inhibeer, en sodoende verbeter die spesifisiteit van die amplifikasiereaksie.Hierdie reagens gebruik 'n geoptimaliseerde qPCR-spesifieke buffer en UNG/dUTP-anti-kontaminasiestelsel om vinnige warmbegin te bereik, wat die doeltreffendheid en sensitiwiteit van qPCR-reaksies aansienlik verbeter.Dit kan goeie standaardkrommes in 'n wye reeks kwantifiseringsareas verkry en akkuraat kwantifiseer, wat vals positiewe versterking effektief voorkom wat veroorsaak word deur oorblywende PCR-produkte of aërosolbesoedeling.Hierdie reagens is verenigbaar met die meeste fluoresserende kwantitatiewe PCR-instrumente van vervaardigers soos Applied Biosystems, Eppendorf, BioRad en Roche ens., en vertoon goeie stabiliteit in gevriesdroogde vorm.
Reagens samestelling
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4× lyoprotektant (opsioneel)
Bergingsvoorwaardes
Langtermyn berging by -20 ℃;kan vir tot 3 maande by 4℃ gestoor word.Meng goed voor gebruik envermy herhaalde vries en ontdooiing.
Fietsry protokol
| Prosedure | Temp. | Tyd | Siklus |
| Spysvertering | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Polimerase aktivering | 95℃ | 1~5 min | 1 |
| Denatureer | 95℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Uitgloeiing en verlenging | 56 ~ 64 ℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Systam Voorbereiding
|
Samestelling |
25µL Volume |
50µL Volume |
Finale konsentrasie |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+gratis) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4× lyobeskermingsmiddel1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mengsel2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sjabloon DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Tot 25µL | Tot 50µL | —— |
1. 'n Finale konsentrasie van 0.2μM vir primers lewer gewoonlik goeie resultate;wanneer reaksieprestasie swak is, pas onderlaagkonsentrasie binne die reeks van 0.2-1μM aan soos nodig.Probekonsentrasie word tipies geoptimaliseer binne die reeks van 0.1-0.3μM deur gradiënteksperimente om optimale kombinasies te vind.
2. Die kopiegetal teikengene wat in verskillende tipes sjablone voorkom, verskil;indien nodig, kan gradiëntverdunning uitgevoer word om die optimale sjabloonbyvoegingshoeveelheid te bepaal.
3. Hierdie stelsel kan gevriesdroog word;wanneer klante hierdie stelsel gebruik sonder vriesdroogvereistes, kan 4×vriesdroogmiddel selektief bygevoeg word; as daar gevriesdroogde produkte benodig word, moet dit tydens vloeibare reagense stadium produkprestasievalidering 4×vriesdroogmiddel byvoeg om konsekwentheid met die gevriesdroogde stelselkomponente te verseker en effekte.
Wanneer die stelsel gebruik wordd vir vriesdroog, berei die voor stelsel as volgende:
| Samestelling | 25µL Reaksiestelsel |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+gratis) (DG) | 5 µL |
| 250mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4× lyobeskermingsmiddel | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mengsel | 1µL |
| ddH2O | Tot 18~20µL |
* Indien ander stelsels vir vriesdroog benodig word, raadpleeg asseblief afsonderlik.
Vriesdroogprosesss
| Prosedure | Temp. | Tyd | Toestand | Druk |
| Voorvries | 4℃ | 30 min | Hou vas |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Verkoeling | ||
| -50 ℃ | 180 min | Hou vas | ||
| Primêre droging | -30 ℃ | 60 min | Verhitting |
Uiteindelike vakuum |
| -30 ℃ | 70 min | Hou vas | ||
| Sekondêre droging | 25℃ | 60 min | Verhitting |
Uiteindelike vakuum |
| 25℃ | 300 min | Hou vas |
2. Die bogenoemde vriesdroogproses is slegs vir verwysing.Verskillende produktipes en verskillende vriesdroërs het verskillende parameters, so aanpassings kan volgens werklike gemaak wordtoestande tydens gebruik.
3. Verskillende gevriesdroogde prosesse kan geskik wees vir verskillende groepgroottes gevriesdroogdeprodukte, dus moet voldoende toetsvalidering uitgevoer word wanneer dit vir grootskaalse produksie gebruik word.
Instruksies vir die gebruik van lyofiliseerd poeier
1. Sentrifugeer die gelyofiliseerde poeier kortliks;
2. Voeg nukleïensuursjabloon by die gevriesdroogde poeier en voeg water by tot 25µL;
3. Meng goed deur sentrifugering en hardloop op masjien.
Kwaliteitsbeheer:
1. Funksionele toetsing: sensitiwiteit, spesifisiteit, reproduceerbaarheid van qPCR.
2. Geen eksogene nuklease aktiwiteit, geen eksogene endo/eksonuklease kontaminasie.
Tegniese informasie:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG gebruik 'n nuwe warmbegin-ensiem wat vinnige warmbegin binne 1~5 minute moontlik maak;deur spesiale bufferformulering is dit geskik vir multipleks fluoresserende kwantitatiewe PCR-reaksies.
2. Dit het hoër spesifisiteit wat aansienlik verbeter die sensitiwiteit van fluoressensie kwantitatiewe PCR limiet opsporing, maak amplifikasie kurwes normalisering, fluoressensie waarde verkry duidelike verbetering by lae konsentrasie templates, geskik as hoë sensitiwiteit fluoressensie kwantitatiewe PCR opsporing reagense.
3. Vir primers met laer uitgloeitemperatuur of langer as 200bp fragmente, word 3-stap metode aanbeveel.
4. Die benuttingsdoeltreffendheid van dUTP en sensitiwiteit vir UNG-ensiem verskil vir verskillende teikengene, dus indien die gebruik van UNG-stelsel lei tot 'n afname in opsporingsensitiwiteit, moet die reaksiestelsel aangepas en geoptimaliseer word.As tegniese ondersteuning benodig word, kontak asseblief ons maatskappy.
5. Gebruik toegewyde areas en pipette voor en na amplifikasie, dra handskoene tydens operasie en vervang dit gereeld;moenie die reaksiebuis oopmaak na PCR voltooiing om kontaminasie van monsters deur PCR produkte te minimaliseer nie.
