Universele SYBR GREEN qPCR Premix (Blou)

Kat nommer: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) is 'n voorafoplossing vir 2×intydse kwantitatiewe PCR-versterking wat gekenmerk word deur hoë sensitiwiteit en spesifisiteit, is blou van kleur en het die effek van monsterbyvoeging.Die kernkomponent Taq DNA polimerase gebruik teenliggaam warm begin om nie-spesifieke amplifikasie effektief te inhibeer as gevolg van primer uitgloeiing tydens monster voorbereiding.Terselfdertyd voeg die formule die bevorderende faktore by om die amplifikasie-doeltreffendheid van PCR-reaksie te verbeter en die amplifikasie van gene met verskillende GC-inhoude (30 ~ 70%) gelyk te maak, sodat kwantitatiewe PCR 'n goeie lineêre verwantskap in 'n wye kwantitatiewe streek.Hierdie produk bevat spesiale ROX Passive Reference Dye, wat van toepassing is op die meeste qPCR-instrumente.Dit is nie nodig om die konsentrasie van ROX op verskillende instrumente aan te pas nie.Dit is slegs nodig om primers en templates by te voeg om die reaksiestelsel vir amplifikasie voor te berei.

Komponente

Universal Blue qPCR Master Mix

Bergingstoestande

Die produk word saam met yspakkies gestuur en kan vir 18 maande by -25℃~-15℃ gestoor word.Dit is nodig om sterk ligbestraling te vermy wanneer die reaksiestelsel gestoor of voorberei word.

Spesifikasie

Instruksies

1.Reaksiestelsel

[Nota]: Meng deeglik voor gebruik om oormatige borrels te voorkom as gevolg van sterk skud.

a) Onderlaagkonsentrasie: Die finale onderlaagkonsentrasie is 0.2μmol/L, en kan ook aangepas word tussen 0.1 en 1.0μmol/L soos toepaslik.

b) Sjabloonkonsentrasie: Indien die sjabloon onverdunde cDNA-voorraadoplossing is, moet die volume wat gebruik word nie 1/10 van die totale volume van die qPCR-reaksie oorskry nie.

c) Sjabloonverdunning: Dit word aanbeveel om die cDNA-voorraadoplossing met 5-10 keer te verdun.Die optimale hoeveelheid sjabloon wat bygevoeg word, is beter as die Ct-waarde wat deur amplifikasie verkry word, 20-30 siklusse is.

d) Reaksiestelsel: Dit word aanbeveel om 20μL of 50μL te gebruik om die doeltreffendheid en herhaalbaarheid van teikengeenamplifikasie te verseker.

e) Stelselvoorbereiding: Berei asseblief voor in die superskoon bankie en gebruik die punte en reaksiebuise sonder nuklease-residu;dit word aanbeveel om die wenke met filterpatrone te gebruik.Vermy kruiskontaminasie en aërosolkontaminasie.

2.Reaksie program

Standaard program

Vinnige program

[Nota]: Die vinnige program is geskik vir die oorgrote meerderheid gene, en standaardprogramme kan vir individuele komplekse sekondêre struktuurgene probeer word.

a) Uitgloeiingstemperatuur en -tyd: Pas asseblief aan volgens die lengte van primer en teikengeen.

b) Fluoresensieseinverkryging (★): Stel asseblief die eksperimentele prosedure in volgens die vereistes in die gebruiksinstruksies van die instrument.

c) Smeltkurwe: Die instrument se verstekprogram kan normaal gebruik word.

3. Resultaat-analise 

'n Minimum van drie biologiese herhalings was nodig vir kwantitatiewe eksperimente.Na die reaksie moet die versterkingskurwe en smeltkurwe bevestig word.

3.1 Amplifikasiekurwe:

Die standaard versterkingskromme is S-vormig.Kwantitatiewe analise is die akkuraatste wanneer die Ct-waarde tussen 20 en 30 val. As Ct-waarde minder as 10 is, is dit nodig om die sjabloon te verdun en die toets weer uit te voer.Wanneer die Ct-waarde tussen 30-35 is, is dit nodig om die sjabloonkonsentrasie of die volume van die reaksiestelsel te verhoog, om die versterkingsdoeltreffendheid te verbeter en die akkuraatheid van resultaatanalise te verseker.Wanneer die Ct-waarde groter as 35 is, kan die toetsresultate nie die uitdrukking van die geen kwantitatief ontleed nie, maar kan vir kwalitatiewe analise gebruik word.

3.2 Smeltkurwe:

Die enkele piek van die smeltkurwe dui aan dat die reaksie-spesifisiteit goed is en kwantitatiewe analise uitgevoer kan word;indien die smeltkurwe dubbele of meervoudige pieke toon, kan kwantitatiewe analise nie uitgevoer word nie.Die smeltkurwe toon dubbele pieke, en dit is nodig om te beoordeel of die nie-teikenpiek primer dimeer of nie-spesifieke amplifikasie deur DNA agarose gel elektroforese is.As dit 'n primer dimeer is, word dit aanbeveel om die primer konsentrasie te verminder of primers met 'n hoë amplifikasie doeltreffendheid te herontwerp.As dit nie-spesifieke amplifikasie is, verhoog asseblief die uitgloeitemperatuur, of herontwerp die primers met spesifisiteit.

Notas

Dra asseblief die nodige PPE, soos laboratoriumjas en handskoene, om jou gesondheid en veiligheid te verseker!

Hierdie produk is SLEGS vir navorsingsgebruik!