Monster vrystelling reagens
Monstervrystellingsreagens is vir molekulêre POCT-diagnostiese scenario's.Vir die twee stelsels van direkte amplifikasie LAMP en direkte amplifikasie PCR, is daar geen behoefte aan nukleïensuur ekstraksie nie.Die ru-lisaat van die monster kan direk geamplifiseer word, die teikengeen kan akkuraat opgespoor word, die monsteropsporingstyd kan verder verkort word, wat perfek ooreenstem met die toepassingsvereistes van molekulêre POCT.Dit is geskik vir neusdeppers, keeldeppers en ander monstertipes.Die verwerkte monsters kan direk gebruik word vir intydse fluoressensie kwantitatiewe PCR of LAMP opsporing, en dieselfde resultate as konvensionele ekstraksie metodes kan bereik word sonder ingewikkelde nukleïensuur ekstraksie operasies.
Bergingsvoorwaardes
Vervoer en berg by kamertemperatuur.
Kwaliteitsbeheer
Funksionele opsporing – kwantitatiewe qPCR: Die 800μl monstervrystellingsreagensstelsel is versterk
met 1000 kopieë Novel Pseudovirus, een neusdeppermonster, wat soortgelyke amplifikasiekrommes tot gevolg het enΔCt-waardes binne ± 0.5 Ct.
Eksperimentele prosedureres
1. Neem 800 μl monstervrystellingsreagens en versprei die lise-oplossing in 1,5 ml monsternemingsbuis
2. Neem die neusdepper of keeldepper met die depper; Neusdepper monsternemingsprosedure: neem die steriele depper en sit dit in die neusgate, beweeg stadig tot ongeveer 1,5 cm diep, draai liggies 4 keer teen die neusslymvlies vir meer as 15 sekondes , herhaal dan dieselfde operasie op die ander neusholte met dieselfde depper. Keel depper monsterneming prosedure: neem die steriele depper en saggies, vee vinnig die faringeale mangels en agterste faringeale muur 3 keer.
3.Plaas die depper dadelik in die monsterbuis.Die depperkop moet vir ten minste 30 sekondes in die stooroplossing gemeng word om te verseker dat die monster volledig in die monsterbuis geëlueer word.
4. Inkubasie by kamertemperatuur (20~ 25℃) vir 1 min, die voorbereiding van lisisbuffer is voltooi.
5. Beide 25μl stelsel RT-PCR en RT-LAMP was verenigbaar met 10μl hoeveelheid sjabloon byvoeging vir opsporing eksperimente.
Notas
1. Die minimum hoeveelheid monster direkte lysaat wat ooreenstem met 'n enkele depper kan aangepas word na 400μl, wat aangepas kan word volgens die toetsbehoeftes.
2. Sodra die monster deur die monstervrystellingsreagens verwerk is, word dit aanbeveel om die volgende fase van die toets so gou as moontlik uit te voer, die intervalwagtyd is verkieslik minder as 1 uur.
3. Die pH van die monsterlysaat is suur, en die opsporingstelsel moet 'n sekere buffer hê.Dit is geskik vir die meeste PCR, RT-PCR en LAMP fluoressensie opsporing met pH buffer, maar nie geskik vir LAMP kolorimetriese opsporing sonder buffer nie.
