2×HiF Taq plus Master Mix
Kat nommer: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) is 'n gereed-vir-gebruik 2 × voorafgemengde oplossing wat Plus HIF DNA Polimerase, dNTP's en geoptimaliseerde buffer bevat.Twee monoklonale teenliggaampies by kamertemperatuur wat polimerase-aktiwiteit en 3′→5′-eksonuklease-aktiwiteit inhibeer, word by die hoofmengsel gevoeg vir maklike en hoogs spesifieke Hot Start PCR.Die verlengingsfaktor word by die meestermengsel gevoeg om die ensiem 'n lang fragment amplifikasie kapasiteit te gee, die lengte van die amplifikasie kan tot 13 kb wees, die ensiem het 'n 5′→3′ DNA polimerase aktiwiteit en 'n 3′→5′ eksonuklease-aktiwiteit, is die getrouheid daarvan 83 keer dié van Taq DNA-polimerase, wat 9 keer dié van gewone DNA-polimerase is.Dit is geskik vir die versterking van komplekse sjablone, die versterkingsproduk is 'n stomp einde.
2×HIF Taq plus Master Mix(Met Kleurstof) het die voordele van vinnig en maklik, hoë sensitiwiteit, sterk spesifisiteit, goeie stabiliteit, ens., die reaksiestelsel hoef slegs primers en templates by te voeg, en kan versterk word deur 'n twee- stapprotokol, wat die eksperimentele stappe vereenvoudig en tyd bespaar.Hierdie produk bevat elektroforese-aanwyserkleurstowwe, en PCR-produkte kan direk vir elektroforese gebruik word.Daarbenewens bevat die produk ook 'n spesifieke beskermende middel, sodat die hoofmengsel stabiele aktiwiteit kan handhaaf na herhaalde vries-ontdooiing.
Bergingsvoorwaardes
Produkte moet vir 1 jaar by -25~-15 ℃ gestoor word.
Spesifikasies
| Produk spesifikasie | Meestermengsel |
| Konsentrasie | 2× |
| Warm Begin | Ingeboude Hot Start |
| Oorhang | Stomp |
| Reaksiespoed | Vinnig |
| Grootte (eindproduk) | Tot 13kb |
| Voorwaardes vir vervoer | Droë ys |
| Produk Tipe | Hoëgetrou PCR-voormengsels |
Instruksies
1.PCR-reaksiestelsel
| Komponente | Volume (μL) |
| DNA-sjabloon | Geskik |
| Voorwaartse onderlaag (10 μmol/L) | 2.5 |
| Omgekeerde onderlaag (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | tot 50 |
2.Aanbevole gebruik van verskillende sjablone
| Tipe sjabloon | Amplifiseer fragmente van 1kb tot 10 kb |
| Genomiese DNA | 50 ng-200 ng |
| Plasmied of virale DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (moenie 10% van die finale PCR-reaksievolume oorskry nie) |
3.Amplifikasieprotokol
1) Tweestap-protokol (kompleksiteitsjabloon)
| Fietsstap | Temp. | Tyd | Siklusse |
| Aanvanklike denaturasie | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasie | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Uitbreiding | 68℃ | 30 sek/kb | |
| Finale uitbreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
2) Drie-stap protokol (gewone protokol)
| Fietsstap | Temp. | Tyd | Siklusse |
| Aanvanklike denaturasie | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasie | 98℃ | 10 sek | 30-35 |
| Uitgloeiing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Uitbreiding | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale uitbreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
3) Uitgloeiingsgradiëntprotokol (kompleksiteitsjabloon)
| Fietsstap | Temperatuur | Tyd | Siklusse |
| Aanvanklike denaturasie | 98℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasie | 98℃ | 10 sek | 15 (1℃ vermindering per siklus) |
| Gradiënt uitgloeiing | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Uitbreiding | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Denaturasie | 98℃ | 10 sek |
20 |
| Uitgloeiing | 55 ℃ | 20 sek | |
| Uitbreiding | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale uitbreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
Kenmerke onder verskillende versterkingsprotokol
| Protokol | Twee-stap | Drie-stap | Gradiënt uitgloeiing |
| Spes. | vinnig | medium | stadig |
| Spesifisiteit | hoog | medium | hoog |
| PCR opbrengs | medium | hoog | medium |
| Opsporing koers | hoog | medium | hoog |
Notas
Dra asseblief die nodige PPE, sulke laboratoriumjas en handskoene, om jou gesondheid en veiligheid te verseker!
