Wild Taq DNA Polimerase
Taq DNA Polimerase is 'n termostabiele DNA polimerase van Thermus aquaticus YT-1, wat 'n 5'→3' polimerase aktiwiteit en 'n 5' flap endonuklease aktiwiteit besit.
Komponente
| Komponent | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq-buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Berging Toestand
Vervoer onder 0°C en word gestoor by -25°C~-15°C.
Eenheid Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat 15 nmol dNTP binne 30 minute by 75°C in suur onoplosbare materiaal inkorporeer.
Kwaliteitsbeheer
1.Proteïensuiwerheidstoets (SDS-PAGE):Die suiwerheid van Taq DNA polimerase was ≥95% bepaal deur SDS-PAGE analise.
2.Endonuclease Aktiwiteit:'n Minimum van 5 U Taq DNA-polimerase met 1 μg λDNA vir 16 uur by 37 ℃ lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
3.Eksonuklease-aktiwiteit:'n Minimum van 5 U Taq DNA polimerase met 1 μg λ -Hind Ⅲ verteer DNA vir 16 uur by 37 ℃ lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
4.Nickase-aktiwiteit:'n Minimum van 5 U Taq DNA polimerase met 1 μg pBR322 DNA vir 16 uur by 37°C lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
5.RNase-aktiwiteit:'n Minimum van 5 U Taq DNA-polimerase met 1.6 μg MS2 RNA vir 16 uur by 37°C lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
6.E coliDNA:5 U van Taq DNA polimerase word gekeur vir die teenwoordigheid van E. coli genomiese DNA met behulp van TaqMan qPCR met primers spesifiek vir die E. coli 16S rRNA lokus.Die E. coli genomiese DNA-kontaminasie is ≤1 kopie.
7.PCR-amplifikasie (5.0 kb Lambda DNA)- 'n 50 µL reaksie wat 5 ng Lambda DNA bevat met 5 eenhede Taq DNA Polimerase vir 25 siklusse van PCR amplifikasie lei tot die verwagte 5.0 kb produk.
Reaksie-opstelling
| Komponente | Volume |
| Sjabloon DNAa | opsioneel |
| 10 μM Voorwaartse onderlaag | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP-mengsel (10 mM elk) | 1 μL |
| 10×Taq-buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polimeraseb | 0,25 μL |
| Nuklease-vrye water | Tot 50 μL |
Notas:
1) Die optimale reaksiekonsentrasie van verskillende sjablone verskil.Die volgende tabel toon die aanbevole sjabloongebruik van 50 µL reaksiestelsel.
| DNA | Bedrag |
| Genomies | 1 ng-1 μg |
| Plasmied of viraal | 1 bl-1 ng |
2) Die optimale konsentrasie van Taq DNA Polimerase kan wissel van 0.25 µL~1 µL in gespesialiseerde toepassings.
ReaksieProgram
| Stap | Temperatuur(°C) | Tyd | Siklusse |
| Aanvanklike denaturasiea | 95 ℃ | 5 min | - |
| Denaturasie | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 siklusse |
| Uitgloeiingb | 60 ℃ | 15 s | |
| Uitbreiding | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Finale Uitbreiding | 72 ℃ | 5 min | - |
Notas:
1) Die aanvanklike denatureringstoestand is geskik vir die meeste amplifikasiereaksies en kan volgens die kompleksiteit van sjabloonstruktuur aangepas word.As die sjabloonstruktuur kompleks is, kan die voor-denatureringstyd verleng word na 5 – 10 minute om die aanvanklike denaturasie-effek te verbeter.
2) Die uitgloeitemperatuur moet aangepas word volgens die Tm-waarde van die onderlaag, wat oor die algemeen gestel is op 3~5 ℃ laer as die Tm-waarde van die onderlaag;Vir komplekse sjablone is dit nodig om uitgloeitemperatuur aan te pas en verlengingstyd te verleng om doeltreffende versterking te verkry.
