One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kat nommer: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix is vir fluoressensie kwantifisering gebaseer op SYBR Green I kleurstof.Deur geen-spesifieke primers te gebruik, word omgekeerde transkripsie- en qPCR-reaksies in een buis voltooi, wat die behoefte aan herhaalde dop-oopmaak en pipet-operasies uitskakel, wat die doeltreffendheid van die toets aansienlik verbeter en die risiko van kontaminasie verminder.Vir RNA-monsters gebruik die kit hittebestande omgekeerde transkriptase vir doeltreffende cDNA-sintese en HotStart Taq DNA-polimerase vir kwantitatiewe amplifikasie.Onder die geoptimaliseerde bufferstelsel kan die sensitiwiteit van die stel so hoog as 0.1 pg wees vir hoogs uitgedrukte teikens en so hoog as 1 pg vir matig uitgedrukte teikens.Die stel is geskik vir die amplifikasie en kwantifisering van DNA-monsters.Dit maak die sensitiewe opsporing en kwantifisering van nukleïensure van verskillende plant- en diermonsters, selle en mikroörganismes moontlik.
Komponente
| No | Naam | Volume | Volume |
| 1 | Gevorderde buffer | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Gevorderde Ensiemmengsel | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase vry H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Bergingsvoorwaardes
Hierdie produk moet vir 1 jaar by -25~-15℃ weg van lig gestoor word.
Instruksies
1.Reaksie stelsel opsetd
| Komponente | Volume (μL) | Volume (μL) | Finale konsentrasie |
| Gevorderde buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Gevorderde Ensiemmengsel | 1 | 2 | - |
| Voorwaartse onderlaag (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Omgekeerde onderlaag (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase vry H2Oc | tot 25 | tot 50 | - |
Notas:
1) a.Tdie finale onderlaagkonsentrasie was 0.2 μmol/L, wat ook aangepas kon word tussen 0.1 en 1μmol/L soos toepaslik.
2) b.Die reagens is uiters sensitief, met Totale RNA in die reeks van 1pg-1μg, en toetsing van menslike monsters het 'n optimale inset van 1 pg-100 ng getoon, wat beheer het vir 'n algehele Ct-waarde in die reeks van 15-30 soos toepaslik.
3) c.Dit word aanbeveel om 20μL of 50μL te gebruik om die geldigheid en reproduceerbaarheid van teikengeenamplifikasie te verseker.
4) d.Berei asseblief voor in die ultra-skoon bankie en gebruik nuklease-residu-vrye punte en reaksiebuise;wenke met filterpatrone word aanbeveel.Vermy kruiskontaminasie en aërosolkontaminasie.
2.Reaksie program
| Fietsstap | Temp. | Tyd | Siklusse |
| Omgekeerde transkripsie | 50 ℃a | 6 min | 1 |
| Aanvanklike denaturasie | 95℃ | 5 min | 1 |
| Amplifikasie reaksie | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Smeltkurwe stadium | Instrument verstek | 1 | |
Notas:
1) a.Die omgekeerde transkripsie temperatuur kan gekies word tussen 50-55°C volgens die eksperimentele behoeftes.Vir DNA-monsters kan die omgekeerde transkripsieproses weggelaat word.
2) b.In spesiale gevalle kan die uitgloei-/verlengingstemperatuur aangepas word volgens die primer Tm-waarde, 60°C word aanbeveel.
Notas
1. Hierdie produk is slegs vir navorsingsgebruik.
2. Werk asseblief met laboratoriumjasse en weggooibare handskoene, vir jou veiligheid.
