RNAse inhibeerder (glicerol vry)
Muriene RNase inhibeerder is 'n rekombinante muriene RNase inhibeerder wat uitgedruk en gesuiwer word vanaf E.coli.Dit bind aan RNase A, B of C in 'n 1:1-verhouding deur nie-kovalente binding, wat die aktiwiteit van die drie ensieme inhibeer en RNA teen afbraak beskerm.Dit is egter nie effektief teen RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H of RNase van Aspergillus nie.Muriene RNase-inhibeerder is getoets deur RT-PCR, RT-qPCR en IVT mRNA, en was verenigbaar met verskeie kommersiële Omgekeerde transkriptases, DNA-polimerases en RNA-polimerases.
In vergelyking met menslike RNase inhibeerders, bevat muriene RNase inhibeerder nie twee sisteiene wat hoogs sensitief is vir oksidasie wat inaktivering van die inhibeerder veroorsaak nie.Dit maak dit stabiel teen lae konsentrasies DTT (minder as 1 mM).Hierdie kenmerk maak dit geskik vir gebruik in reaksies waar hoë konsentrasies DTT nadelig is vir die reaksie (bv. Real-time RT-PCR).
Atoepassing
Hierdie produk kan wyd gebruik word in enige eksperiment waar RNase-interferensie moontlik is om RNA-afbraak te vermy, soos:
1.Eerste-string cDNA sintese, RT-PCR, RT-qPCR, ens.;
2. Beskerm RNA teen degradasie in in vitro transkripsie/translasie (bv. virale replikasie in vitro);
3.Inhibisie van RNase-aktiwiteit tydens RNA-isolasie en suiwering.
Bergingsvoorwaardes
Berg by -25～-15℃;
Vries-ontdooi siklusse ≤ 5 keer;
Geldig vir 1 jaar.
Eenheid definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid RNase-inhibeerder wat benodig word om die aktiwiteit van 5 ng RNase A met 50% te inhibeer.
Molekulêre gewig
RNase-inhibeerder (glicerolvry) is 'n proteïen van 50 kDa.
Kwaliteitsbeheer
Eksonuklease Aktiwiteit:
Inkubasie van 40 U ensiem met 1 μg λ-Hind III-verteer DNA vir 16 uur by 37°C het gelei tot geen waarneembare afbraak van die DNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
Endonuklease aktiwiteit:
Inkubasie van 40 U ensiem met 1 μg λ DNA vir 16 uur by 37°C het gelei tot geen waarneembare degradasie van die DNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
Nicking Aktiwiteit:
Inkubasie van 40 U ensiem met 1 μg pBR322 vir 16 uur by 37℃ het gelei tot geen waarneembare degradasie van die DNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
RNase Aktiwiteit:
Inkubasie van 40 U ensiem met 1.6 μg MS2 RNA vir 4 uur by 37 ℃ het gelei tot geen waarneembare degradasie van die RNA soos bepaal deur gelelektroforese nie.
E.coli DNA:
40 U ensiem word deur TaqMan qPCR opgespoor.Die E.coli DNA is ≤ 0. 1pg/40U.
Nopmerkings
1.Moenie skud of heftig roer om ensiem-inaktivering te voorkom nie.
2.RNase-inhibeerder is aktief by temperature wat wissel van 25℃ tot 55℃ en is geïnaktiveer by ≥65℃.
3.Die aktiwiteit van RNase H, RNase 1 en RNase T1 word nie geïnhibeer nie.
4. Die pH-reeks vir die inhibering van RNase-aktiwiteit is wyd (aktief by pH 5-9), met maksimum aktiwiteit by pH 7-8.
