Warm Start Bst 2.0 DNA Polimerase (Gliserol vry)
Bst DNA polimerase V2 is afgelei van Bacillus stearothermophilus DNA Polimerase I, wat 5′→3′ DNA polimerase aktiwiteit en sterk kettingvervangingsaktiwiteit het, maar geen 5′→3′ eksonuklease aktiwiteit.Bst DNA Polimerase V2 is ideaal geskik vir string-verplasing, isotermiese amplifikasie LAMP (Loop gemedieerde isotermiese amplifikasie) en vinnige volgordebepaling.Bst DNA polimerase V2 is 'n warmbegin weergawe gebaseer op Bst DNA polimerase V2 (HC5005A) verkry deur omkeerbare modifikasie tegnologie, wat DNA polimerase aktiwiteit by kamertemperatuur kan inhibeer, sodat die reaksiestelsel by kamertemperatuur bedryf en geformuleer kan word om nie -spesifieke versterking en verbeter reaksiedoeltreffendheid, en hierdie weergawe kan gevriesdroog word.Daarbenewens word sy aktiwiteit by hoë temperature vrygestel, so daar is geen behoefte aan 'n aparte aktiveringsstap nie.
Komponente
| Komponent | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA-polimerase V2 (glicerolvry) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mm) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Aansoeke
1.LAMP isotermiese versterking
2.DNA-string enkelverplasingsreaksie
3.Hoë GC geenvolgordebepaling
4.DNA-volgordebepaling van nanogramvlak.
Berging Toestand
Vervoer onder 0°C en word gestoor by -25°C~-15°C.
Eenheid Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat 25 nmol dNTP binne 30 minute by 65°C in suur onoplosbare materiaal inkorporeer.
Kwaliteitsbeheer
1.Proteïensuiwerheidstoets (SDS-PAGE):Die suiwerheid van Bst DNA polimerase V2 is ≥99% bepaal deur SDS-PAGE analise deur gebruik te maak van Coomassie Blue opsporing.
2.EndonukleaseAktiwiteit:Inkubasie van 'n 50 μL reaksie wat 'n minimum van 8 U Bst DNA polimerase V2 bevat met 1 μg λDNA vir 16 uur by 37 ℃ lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
3.Eksonuklease-aktiwiteit:Inkubasie van 'n 50 μL reaksie wat 'n minimum van 8 U Bst DNA polimerase V2 bevat met 1 μg λ -Hind Ⅲ verteer DNA vir 16 uur by 37 ℃ lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
4.Nickase-aktiwiteit:Inkubasie van 'n 50 μL reaksie wat 'n minimum van 8 U Bst DNA polimerase V2 bevat met 1 μg pBR322 DNA vir 16 uur by 37°C lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
5.RNase-aktiwiteit:Inkubasie van 'n 50 μL reaksie wat 'n minimum van 8 U van Bst DNA polimerase V2 bevat met 1.6 μg MS2 RNA vir 16 uur by 37°C lei tot geen waarneembare degradasie soos bepaal nie.
6.E coliDNA:120 U van Bst DNA polimerase V2 word gekeur vir die teenwoordigheid van E. coli genomiese DNA met behulp van TaqMan qPCR met primers spesifiek vir die E. coli 16S rRNA lokus.Die E. coli genomiese DNA-kontaminasie is ≤1 kopie.
LAMP Reaksie
| Komponente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mm) | 1,5 μL |
| dNTP's (10 mM elk) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 Groen (25×)a | 1,0 μL |
| Primer mengselb | 6 μL |
| Bst DNA Polimerase V2 (Gliserolvry) (8 U/uL) | 1 μL |
| Sjabloon | × μL |
| ddH₂O | Tot 25 μL |
Notas:
1) a.SYTOTM 16 Groen (25×): Volgens eksperimentele behoeftes kan ander kleurstowwe as plaasvervangers gebruik word;
2) b.Onderlaagmengsel: verkry deur 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2.5 µM F3, 2.5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB en ander volumes te meng.
Reaksie en Toestand
1 × HC Bst V2 Buffer, die inkubasietemperatuur is tussen 60°C en 65°C.
Hitte inaktivering
80°C, 20 min
