Virale DNA/RNA-ekstraksiestel
Hierdie stel is geskik vir die vinnige onttrekking van hoë-suiwer virale DNA/RNA uit monsters soos nasofaryngeale deppers, omgewingsdeppers, selkultuur-supernatante en weefselhomogeen-supernatante.Die kit is gebaseer op silika membraan suiwering tegnologie wat die behoefte uitskakel vir die gebruik van fenol/chloroform organiese oplosmiddels of tydrowende alkohol presipitasie om virale DNA/RNA van hoë gehalte te onttrek.Die nukleïensure wat verkry is, is vry van onsuiwerhede en gereed vir gebruik in stroomaf eksperimente soos omgekeerde transkripsie, PCR, RT-PCR, intydse PCR, volgende-generasie volgordebepaling (NGS), en Northern klad.
Bergingstoestande
Berg by 15 ~ 25 ℃, en vervoer by kamertemperatuur
Komponente
| Komponente | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNase-vrye ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA-kolomme | 100 |
| Versamelingsbuise (2 ml) | 100 |
| RNase-vrye versamelbuise (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Verskaf 'n omgewing vir lysis en binding.
Buffer RW:Verwyder oorblywende proteïene en ander onsuiwerhede.
RNase-vrye ddH2O:Elueer DNA/RNA van die membraan in die spinkolom.
FastPure RNA-kolomme:Adsorbeer spesifiek DNA/RNA.
Versamelingsbuise 2 ml:Versamel filtraat.
RNase-vrye versamelbuise 1,5 ml:Versamel DNA/RNA.
Aansoeke
Nasofaryngeale deppers, omgewingsdeppers, selkultuur-supernatante en weefselhomogeen-supernatante.
Self-voorbereide Materials
RNase-vrye pipetpunte, 1,5 ml RNase-vrye sentrifugeerbuise, sentrifugeer, draaikolkmenger en pipette.
Eksperiment Proses
Voer al die volgende stappe uit in 'n bioveiligheidskas.
1. Voeg 200 μl van die monster by 'n RNase-vrye sentrifugebuis (maak aan met PBS of 0.9% NaCl in geval van onvoldoende monster), voeg 500 μl Buffer VL by, meng goed deur vir 15 – 30 sek. te vortex, en sentrifugeer kortliks om die mengsel aan die onderkant van die buis te versamel.
2. Plaas FastPure RNA-kolomme in 'n versamelbuise van 2 ml.Dra die mengsel van Stap 1 oor na FastPure RNA-kolomme, sentrifugeer teen 12 000 rpm (13 400 × g) vir 1 min en gooi die filtraat weg.
3. Voeg 600 μl Buffer RW by FastPure RNA-kolomme, sentrifugeer teen 12 000 rpm (13 400 × g) vir 30 sek. en gooi die filtraat weg.
4. Herhaal Stap 3.
5. Sentrifugeer die leë kolom teen 12 000 rpm (13 400 × g) vir 2 min.
6. Dra FastPure RNA-kolomme versigtig oor in 'n nuwe RNase-vrye versamelbuise 1.5 ml (verskaf in die stel), en voeg 30 – 50 μl RNase-vrye ddH2O by die middel van die membraan sonder om aan die kolom te raak.Laat staan by kamertemperatuur vir 1 min en sentrifugeer teen 12 000 rpm (13 400 × g) vir 1 min.
7. Gooi FastPure RNA-kolomme weg.Die DNA/RNA kan direk vir daaropvolgende toetse gebruik word, of by -30~ -15°C vir 'n kort tydperk of -85 ~-65°C vir 'n langer tydperk gestoor word.
Notas
Slegs vir navorsingsgebruik.Nie vir gebruik in diagnostiese prosedures nie.
1. Equilibreer monsters vooraf tot kamertemperatuur.
2. Virusse is hoogs aansteeklik.Maak asseblief seker dat alle nodige veiligheidsmaatreëls getref word voor die eksperiment.
3. Vermy herhaalde bevriesing en ontdooiing van die monster, aangesien dit kan lei tot degradasie of verminderde opbrengs van die onttrekte virale DNA/RNA.
4. Selfvoorbereide toerusting sluit in RNase-vrye pipetpunte, 1,5 ml RNase-vrye sentrifugeerbuise, sentrifugeer, draaikolkmenger en pipette.
5. Wanneer jy die kit gebruik, dra 'n laboratoriumjas, weggooibare latexhandskoene en 'n weggooibare masker en gebruik RNase-vrye verbruiksgoedere om die risiko van RNase-besmetting te verminder.
6. Voer alle stappe by kamertemperatuur uit, tensy anders gespesifiseer.
Meganisme en werkvloei
