UDG/UNG Ensieme
UDG(uracil DNA-glikosilase) kan die hidrolise van die N-glikosidiese skakel tussen die uracil-basis en die suiker-fosfaat-ruggraat in ssDNA en dsDNA kataliseer.Dit kan maklik aërosolbesoedeling beheer en is geskik vir algemene molekulêre biologie stelsels soos PCR, qPCR, RT-qPCR en LAMP.
Spesifikasies
| Uitdrukking Gasheer | Rekombinante E. coli met uracil DNA glikosilase geen |
| Molekulêre gewig | 24. 8kDa |
| Reinheid | ≥95% (SDS-BLADSY) |
| Hitte inaktivering | 95℃, 5~10 min |
| Eenheid Definisie | Een eenheid (U) word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat benodig word om die hidrolise van l μg dU-bevattende dsDNA binne 30 minute by 25℃ te kataliseer. |
Berging
Die produk moet vir twee jaar by -25℃~-15°C gestoor word.
Instruksies
1.Voorbereiding van die PCR-reaksiemengsel volgens die volgende stelsel
| Komponente | Volume (μL) | Finale konsentrasie |
| 10×PCR-buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Loog) | 1 | 0,2 mmol/Loog |
| Sjabloon DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Onderlaag 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA Polimerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Urasiel DNA Glikosilase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Tot 50 | - |
Let wel: Volgens die eksperimentele vereistes kan die finale konsentrasie van dUTP tussen 0.2-0.6 mmol/L aangepas word, en 0.2 mmol/L dTTP kan selektief bygevoeg word.
2.Amplifikasie prosedure
| Fietsstap | Temperatuur | Tyd | Siklusse |
| dU-bevattende sjabloondegradasie | 25℃ | 10 minute | 1 |
| UDG aktivering, sjabloon aanvanklike denaturering | 95℃ | 5 ~ 10 minute | 1 |
| Denaturasie | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Uitgloeiing | 60 ℃ | 20 sek | |
| Uitbreiding | 72℃ | 30 sek/kb | |
| Finale uitbreiding | 72℃ | 5 min | 1 |
Let wel: Die reaksietyd by 25°C kan binne 5-10 minute aangepas word volgens die eksperimentele vereistes.
Notas
1.UDG is aktief in die meeste PCR-reaksiebuffers.
2.Ensieme moet in 'n yskas of op 'n ysbad gestoor word wanneer dit gebruik word, en moet onmiddellik na gebruik by -20°C gestoor word.
3.Dra asseblief die nodige PPE, soos laboratoriumjas en handskoene, om jou gesondheid en veiligheid te verseker!
