Rnase A
Ribonuklease A (RNaseA) is 'n enkelstrengige polipeptied wat 4 disulfiedbindings bevat met 'n molekulêre gewig van ongeveer 13,7 kDa.RNase A is 'n endoribonuklease wat spesifiek enkelstring-RNA by C- en U-residue afbreek.Spesifiek herken die splitsing die fosfodiesterbinding wat gevorm word deur die 5'-ribose van 'n nukleotied en die fosfaatgroep op die 3'-ribose van die aangrensende pirimidiennukleotied, sodat die 2,3'-sikliese fosfate na die ooreenstemmende 3 gehidroliseer word. ′nukleosiedfosfate (bv. pG-pG-pC-pA-pG word deur RNase A gesplit om pG-pG-pCp en A-PG te genereer).RNase A is die mees aktiewe in die splitsing van enkelstring-RNA.Aanbevole werkkonsentrasie is 1-100μG/mL, versoenbaar met verskeie reaksiestelsels.Lae soutkonsentrasie (0-100 mM NaCl) kan gebruik word om enkelstrengs RNA, dubbelstring RNA en RNA kettings wat deur RNA-DNA hibridisasie gevorm word, te sny.By hoë soutkonsentrasie (≥0.3 M), klief RNase A egter net spesifiek enkelstring-RNA.
RNase A word die meeste gebruik om RNA te verwyder tydens die voorbereiding van plasmied DNA of genomiese DNA. Of DNase aktief is tydens die voorbereidingsproses, kan maklik die reaksie beïnvloed.Die tradisionele metode van kook in 'n waterbad kan gebruik word om DNase-aktiwiteit te deaktiveer.Hierdie produk bevat nie DNase en protease nie, en vereis nie hittebehandeling voor gebruik nie.Daarbenewens kan hierdie produk ook gebruik word in molekulêre biologie eksperimente soos RNase beskerming analise en RNA volgorde analise.
Bergingsvoorwaardes
Die produk kan by -25～-15℃ gestoor word, geldig vir 2 jaar.
Instruksies
Dit is een van die algemene metodes vir die voorbereiding van RNase A-bergingsoplossing.Dit kan ook voorberei word deurander metodes volgens die tradisionele metodes in die laboratorium of verwysingsliteratuur (soosdirek oplos in 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 of Tris-NaCl-oplossing)
1. Gebruik 10 mM natriumasetaat (pH 5.2) om 10 mg/ml RNase A-bergingsoplossing voor te berei
2. Verhit by 100 ℃ vir 15 min
3. Koel af tot kamertemperatuur, voeg 1/10 volume van 1 M Tris-HCl (pH 7.4) by, verstel die pH na 7.4 (virVoeg byvoorbeeld 500 ml 10g/ml RNase-bergingsoplossing 1M Tris-HCL, PH7.4 by)
4. Onderverpak by -20 ℃ vir bevrore berging, wat vir tot 2 jaar stabiel kan wees.
[Notas]: Wanneer RNaseA-oplossing onder neutrale toestande gekook word, sal RNase-presipitasie vorm;Kook dit teen 'n laer pH, en as daar neerslag is, kan dit waargeneem word, wat veroorsaak kan word deur die teenwoordigheid van proteïen onsuiwerhede.As sediment na kook gevind word, kan onsuiwerhede deur hoëspoed sentrifugering (13000rpm) verwyder word en dan onderverpak word vir vriesberging.
Produk inligting
| Sinonieme | Ribonuklease I;Pankreas ribonuklease;Ribonuklease 3'-pyrimidnooligonukleotidohidrolase;rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Voorkoms | Wit gevriesdroogde poeier |
| Molekulêre gewig | ~ 13,7 kDa (aminosuurvolgorde) |
| Ph-waarde | 7.6 (aktiwiteitsreeks 6-10) |
| Geskikte temperatuur | 60 ℃ (aktiwiteitsreeks 15-70 ℃) |
| Aktiveer agent | Na2+.K+ |
| Inhibeerder | RNAse inhibeerder |
| Inaktiveringsmetode | Kan nie gedeaktiveer word deur verhitting nie, dit word voorgestel om sentrifugekolom te gebruik |
| Oorsprong | Bees |
| Oplosbaarheid | Oplosbaar in water (10mg/ml) |
| Verlies op droog | ≤5,0% |
| Ensiemaktiwiteit | ≥60 Kunitz-eenhede/mg |
| Iso-elektriese punt | 9.6 |
Notas
Vir jou veiligheid en gesondheid, dra asseblief laboratoriumjasse en weggooibare handskoene vir operasie.
