Muis genotipering Kit

Kat nommer: HCR2021A

Hierdie produk is 'n kit wat ontwerp is vir die vinnige identifikasie van muis genotipes, insluitend DNA ru-ekstraksie en PCR amplifikasie stelsel.Die produk kan gebruik word vir PCR-versterking direk vanaf muisstert, oor, tone en ander weefsels na eenvoudige splitsing deur Lysis Buffer en Proteinase k.Geen oornagvertering, fenol-chloroform-ekstraksie of kolomsuiwering nie, wat eenvoudig is en die tydrowende eksperimente verkort.Die produk is geskik vir amplifikasie van teikenfragmente tot 2kb en multipleks PCR-reaksies met tot 3 pare primers.Die 2×Mouse Tissue Direct PCR-mengsel bevat geneties gemanipuleerde DNA-polimerase, Mg²⁺, dNTP's en 'n geoptimaliseerde bufferstelsel om hoë amplifikasie-doeltreffendheid en inhibeerdertoleransie te verskaf, sodat PCR-reaksies uitgevoer kan word deur templaat en primers by te voeg en die produk te rehidreer tot 1×.Die PCR-produk wat met hierdie produk geamplifiseer word, het 'n prominente "A"-basis aan die 3'-punt en kan direk gebruik word vir TA-kloning na suiwering.

Komponente

Bergingsvoorwaardes

Produkte moet vir 2 jaar by -25~-15℃ gestoor word.Na ontdooiing kan Lysis Buffer by 2 ~ 8 ℃ gestoor word vir korttermyn veelvuldige gebruik, en meng goed wanneer dit gebruik word.

Toepassing

Hierdie produk is geskik vir muisuitklopontleding, transgeniese opsporing, genotipering ensovoorts.

Kenmerke

1.Eenvoudige bewerking: nie nodig om genomiese DNA te onttrek nie;

2.Wye toediening: geskik vir direkte versterking van verskeie muisweefsels.

Instruksies

1.Vrystelling van genomiese DNA

1) Voorbereiding van lysaat

Weefselisaat word voorberei volgens die aantal muismonsters wat gelys moet word (weefsellisaat moet ter plaatse volgens die dosis voorberei word en deeglik gemeng word vir gebruik), en die proporsie reagense benodig vir 'n enkele monster is soos volg:

2) Monstervoorbereiding en Lysis

Aanbevole weefselgebruik

Neem 'n gepaste hoeveelheid muisweefselmonsters in skoon sentrifugeerbuise, voeg 200μL vars weefsellisaat by elke sentrifugebuis, vortex en skud, inkubeer dan by 55 ℃ vir 30 minute, en verhit dan by 98 ℃ vir 3 minute.

3) Sentrifugering

Skud die lysaat goed en sentrifugeer teen 12 000 rpm vir 5 minute.Die supernatant kan as templaat vir PCR-amplifikasie gebruik word.As die sjabloon benodig word vir berging, dra die supernatant oor na 'n ander steriele sentrifugebuis en stoor by -20 ℃ vir 2 weke.

2.PCR-versterking

Verwyder die 2×muisweefsel direkte PCR-mengsel van -20℃ en ontdooi op ys, meng onderstebo en berei die PCR-reaksiestelsel voor volgens die volgende tabel (werk op ys):

Let wel:

a) Die hoeveelheid bygevoeg moet nie 1/10 van die sisteem oorskry nie, en indien te veel bygevoeg word, kan PCR amplifikasie geïnhibeer word.

Aanbevole PCR-toestande

Let wel:

a) Uitgloeitemperatuur: Met verwysing na die Tm-waarde van die onderlaag, word dit aanbeveel om die uitgloeitemperatuur op die kleiner Tm-waarde van die onderlaag +3~5℃ te stel.

Algemene probleme en oplossings

1.Geen geteikende stroke nie

1) Oormatige lise produk.Kies die mees geskikte hoeveelheid sjabloon, gewoonlik nie meer as 1/10 van die stelsel nie;

2) Te groot steekproefgrootte.Verdun die lysaat 10 keer en versterk dan, of verminder die monstergrootte en herlisis;

3) Weefselmonsters is nie vars nie.Dit word aanbeveel om vars weefselmonsters te gebruik;

4) Swak onderlaag kwaliteit.Gebruik genomiese DNA vir amplifikasie om die primer kwaliteit te verifieer en die primer ontwerp te optimaliseer.

2.Nie-spesifieke versterking

1) Die uitgloeitemperatuur is te laag en die siklusgetal is te hoog.Verhoog die uitgloeitemperatuur en verminder die aantal siklusse;

2) Sjabloonkonsentrasie is te hoog.Verminder die hoeveelheid sjabloon of verdun die sjabloon 10 keer na amplifikasie;

3) Swak primer spesifisiteit.Optimaliseer die onderlaagontwerp.

Notas

1.Om kruiskontaminasie tussen monsters te vermy, moet veelvuldige monsternemingsgereedskap voorberei word, en die oppervlak van die gereedskap kan skoongemaak word met 2% natriumhipochlorietoplossing of nukleïensuurskoonmaker na elke monsterneming indien herhaalde gebruik vereis word.

2.Dit word aanbeveel om vars muisweefsels te gebruik, en die monsternemingsvolume moet nie te groot wees om te verhoed dat die amplifikasieresultate beïnvloed word nie.

3.Lysis Buffer moet gereelde vries-ontdooi vermy, en kan gestoor word by 2 ~ 8 ℃ vir korttermyn veelvuldige gebruik.As dit by lae temperatuur gestoor word, kan neerslag voorkom, en moet volledig opgelos word voor gebruik.

4.PCR Mix moet gereelde vries-ontdooi vermy, en kan by 4 ℃ gestoor word vir kort termyn herhaalde gebruik.

5.Hierdie produk is slegs vir wetenskaplike eksperimentele navorsing en moet nie in kliniese diagnose of behandeling gebruik word nie.