M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase

Neoscript Reverse Transcriptase is 'n omgekeerde transkriptase wat verkry word deur mutasiesifting van die M-MLV-geen van Moloney-muizenleukemievirus oorsprong en uitdrukking in E.coli.Die ensiem verwyder RNase H-aktiwiteit, het hoër temperatuurverdraagsaamheid en is geskik vir hoë-temperatuur omgekeerde transkripsie.Daarom is dit nuttig om die ongunstige effekte van die RNA hoëvlakstruktuur en nie-spesifieke faktore op cDNA sintese uit te skakel, en het hoër stabiliteit en omgekeerde transkripsie sintese vermoë.Die ensiem het hoër stabiliteit en omgekeerde transkripsie sintese vermoë.

Komponente

1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase

2.5 × Eerste-Strand-buffer (opsioneel)

* 5 × Eerste-Strand Buffer bevat nie dNTP nie, voeg asseblief dNTP's by wanneer u die reaksiestelsel voorberei

Aanbevole toepassing

1.Een-stap qRT-PCR.

2.RNA virus opsporing.

Berging Toestand

-20°C vir langtermynberging, moet goed gemeng word voor gebruik, vermy gereelde vries-ontdooiing.

Eenheid Definisie

Een eenheid inkorporeer 1 nmol dTTP in 10 minute by 37°C deur gebruik te maak van poly(A)•oligo(dT)₂₅as sjabloon/onderlaag.

Kwaliteitsbeheer

1.SDS-PAGE elektroforetiese suiwerheid groter as 98%.

2.Amplifikasie sensitiwiteit, bondel-tot-batch beheer, stabiliteit.

3.Geen eksogene nuklease aktiwiteit, geen eksogene endonuklease of eksonuklease kontaminasie

Reaksie-opstelling vir eerste kettingreaksie-oplossing

1.Voorbereiding van die reaksiemengsel

Notas:a/b: Kies asseblief verskillende tipes primers volgens jou eksperimentele behoeftes.

2.Verhit by 65°C vir 5min en koel vinnig af op ys vir 2min.

3.Voeg die volgende komponente by die bogenoemde stelsel tot 'n totale volume van 20µL en meng liggies:

4. Voer asseblief die reaksie uit volgens die volgende voorwaardes:

(1) As Random Primer gebruik word, moet die reaksie uitgevoer word by 25 ℃ vir 10 minute, en dan by 50 ℃ vir 30 ~ 60 minute;

(2) Indien Oligo dT of spesifieke primers gebruik word, moet die reaksie by 50℃ vir 30~60min uitgevoer word.

5.Verhit by 95 ℃ vir 5 minute om Neoscript Reverse Transcriptase te deaktiveer en die reaksie te beëindig.

6.Omgekeerde transkripsie produkte kan direk gebruik word in PCR reaksie en fluoressensie kwantitatiewe PCR reaksie, of gestoor word by -20 ℃ vir 'n lang tyd.

PCR Raksie:

1.Voorbereiding van die reaksiemengsel

Notas:a: As te veel eerste kettingreaksie-oplossing bygevoeg word, kan die PCR-reaksie geïnhibeer word.

2.PCR-reaksieprosedure

Notas

1.Geskik vir omgekeerde transkripsie temperatuuroptimalisering in die reeks van 42 ℃ ~ 55 ℃.

2.Dit het beter stabiliteit, is geskik vir hoë temperatuur omgekeerde transkripsie versterking.Daarbenewens is dit gunstig om doeltreffend deur komplekse strukturele streke van RNA te gaan.Ook ditis geskik vir een-stap multipleks fluoressensie kwantitatiewe RT-PCR opsporing.

3.Goeie verenigbaarheid met verskeie PCR amplifikasie ensieme en is geskik vir hoë sensitiwiteit RT-PCR reaksies.

4.Geskik vir hoë sensitiwiteit een-stap fluoressensie kwantitatiewe RT-PCR reaksie, verbeter effektief die opsporing koers van lae konsentrasie van templates.

5.Geskik vir cDNA-biblioteekkonstruksie.