5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG

Kat nommer: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) is 'n hoogs stabiele een-buis-sonde-gebaseerde mengsel wat geskik is vir een-stap omgekeerde transkripsie en kwantitatiewe PCR (qRT-PCR).Dit ondersteun voorafmenging van primers en probes en bly stabiel na langdurige berging by lae temperatuur.Die monster wat getoets moet word, kan direk bygevoeg word wanneer dit gebruik word, sonder bykomende buisopening/pipetteerbewerking.Hierdie produk verskaf komponente, bv. warmstart-DNA-polimerase, M-MLV, hitte-labiele uracil-DNA-glikosilase (TS-UNG), RNase-inhibeerder, MgCl₂, dNTP's (met dUTP in plaas van dTTP), en stabiliseerders.Met die geneties gemodifiseerde vinnige amplifikasie omgekeerde transkriptase en DNA-polimerase, is dit moontlik om die PCR-amplifikasie binne 20-40 minute te voltooi.Hierdie reagens gebruik spesiale buffer vir qPCR met gemengde ensieme van anti-inhiberende amplifikasie-ensiem en UNG-ensiem.Daarom kan dit goeie amplifikasie van teikengene verkry en valse amplifikasie voorkom wat veroorsaak word deur PCR-residu- en aërosolbesoedeling.Hierdie reagens is verenigbaar met die meeste fluoressensie kwantitatiewe PCR-instrumente van vervaardigers soos Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad en Roche.

Komponent

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG Mix

2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)

Bergingsvoorwaardes

Alle komponente moet by -20 ℃ gehou word vir langtermynberging en 4 ℃ vir tot 3 maande.Meng asseblief deeglik na ontdooiing en sentrifugeer voor gebruik.Vermy gereelde vries-ontdooiing.

qRT-PCR Reaksie Stelsel Voorbereiding

1) a.Die finale konsentrasie van onderlaag is gewoonlik 0.2μM.Vir beter resultate kan die onderlaagkonsentrasie binne die reeks van 0.2-1μM geoptimaliseer word.Oor die algemeen kan die sondekonsentrasie binne die reeks van 0.1-0.3μM geoptimaliseer word.

2) b.Wanneer 'n vinnige PCR-prosedure gebruik word, kan die verhoging van die konsentrasie van primers en probes beter amplifikasieresultate tot gevolg hê, en hul verhouding moet dienooreenkomstig geoptimeer word.

3) Verskillende tipes monsters bevat verskillende tipes en inhoud van inhibeerder en kopienommer van teikengeen.Die monstervolume moet volgens werklike toestand in ag geneem word.Maak 'n verdunning van die monster met nukleasevrye water of TE Buffer, indien nodig.

Reaksie Ctoestande

Kwaliteitsbeheer

1.Funksie-opsporing: sensitiwiteit, spesifisiteit en herhaalbaarheid van qPCR.

2.Geen eksogene nuklease aktiwiteit: geen eksogene endonuklease en eksonuklease besoedeling.

Notas

1.Amplifikasietempo van vinnige DNA-polimerase is nie minder nie as 1kb/10s.Verskillende PCR-instrumente het verskillende verhitting- en verkoelingsspoed, temperatuurbeheermodusse en termiese geleidingsvermoë, en dus is optimalisering van jou primer/probe-konsentrasie en hardloopmetode in kombinasie met jou spesifieke vinnige PCR-instrument noodsaaklik.

2.Hierdie produk het wye toepaslikheid, en dit is geskik vir hoë-sensitiwiteit molekulêre diagnose.Drie-stap PCR metode word aanbeveel vir primers met lae uitgloeiingstemperatuur of vir amplifikasie van lang fragmente oor 200 bp.

3.Aangesien verskillende amplikone verskillende benuttingsdoeltreffendheid van dUTP en verskillende sensitiwiteit vir UNG het, moet die reagense geoptimaliseer word indien die opsporingsensitiwiteit afneem wanneer UNG-stelsel gebruik word.Kontak ons ​​asseblief vir tegniese ondersteuning indien nodig.

4.Om amplifikasie van oordrag-PKR-produkte te vermy, word toegewyde eksperimentele area en pipet vir amplifikasie benodig.Werk met handskoene en verander gereeld en moenie die PCR-buis na amplifikasie oopmaak nie.