2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)

Kat nommer: HCB5151A

SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) is ontwerp om PCR direk vanaf monsters uit te voer sonder DNA-ekstraksie of monstervoorbereiding.Hierdie reagens bestaan ​​uit warmstart-DNA-polimerase, uracil-DNA-glikosilase (UNG), RNase-inhibeerder, MgCl₂, dNTP's (met dUTP in plaas van dTTP), en stabiliseerders, vir kwantitatiewe PCR (qPCR).Hierdie reagens vorm 'n hoë inhibeerder-toleransie, en dus kan dit direk toegepas word op die opsporing van monsters soos keeldepper, speeksel, anti-gekoaguleerde volbloed, plasma en serum sonder DNA-ekstraksie.Die reagens gebruik eie buffer vir qPCR met gemengde ensieme van anti-inhiberende DNA-polimerase en UNG-ensiem.Daarom kan dit 'n goeie amplifikasie van teikengene verkry in monsters wat inhibeerders bevat en vals positiewe amplifikasie wat veroorsaak word deur PCR-residu- en aërosolbesoedeling inhibeer.Hierdie reagens is versoenbaar met die meeste fluoresserende kwantitatiewe PCR-instrumente, soos Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche ensovoorts.

Komponente

1. 50×SensiDirect Ensiem/UNG Mengsel

2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)

Bergingstoestande

Alle komponente moet by -20 ℃ gehou word vir langtermynberging en 4 ℃ vir tot 3 maande.Meng asseblief deeglik na ontdooiing en sentrifugeer voor gebruik.Vermy gereelde vries-ontdooiing.

Fietsry protokol

Pipetteerinstruksies

1. Die finale konsentrasie van onderlaag is gewoonlik 0.2μM.Vir beter resultate kan die onderlaagkonsentrasie binne die reeks van 0.2-1μM geoptimaliseer word.

2. Oor die algemeen kan die sondekonsentrasie binne die reeks van 0.1-0.3μM geoptimaliseer word.Die optimale konsentrasie van die sonde hou verband met die intydse PCR-amplifikasie-instrument, die tipe sonde en die tipe fluoresserende etikettering.Verwys asseblief na die instrumenthandleiding of die spesifieke vereistes van elke fluoresserende sonde.

3. Verskillende tipes monsters bevat verskillende tipes en inhoud van inhibeerder en kopienommer van teikengeen.Die monstervolume moet volgens werklike toestand in ag geneem word.Maak 'n verdunning van die monster deur nukleasevrye water of TE Buffer by te voeg, indien nodig.

4. Aanbevole volume van verskillende monsters:

Kwaliteitsbeheer

1. Funksie opsporing: sensitiwiteit, spesifisiteit en herhaalbaarheid van qPCR.

2. Geen eksogene nuklease aktiwiteit: geen eksogene endonuklease en eksonuklease besoedeling.

Notas van produk

1. Hierdie produk gebruik 'n nuwe tipe warmbegin-DNA-polimerase, wat binne 1-5 minute geaktiveer kan word. Aangesien die reaksiebuffer daarvan geoptimaliseer is, is dit meer geskik vir dubbel- of meervoudige fluoressensie-kwantitatiewe PCR met behulp van sondemetode.

2. As die Rn-waarde van die PCR-amplifikasie te laag is of die amplifikasie ooglopend geïnhibeer is, kan die vermindering van die monsterhoeveelheid, verhoging van reaksievolume of vorige verdunning van die monster die resultate verbeter.

3. Die versameling van bloed, speeksel, urine, keeldepper, ens. moet die kliniese kriteriavereistes volg, en vars monster kan gebruik word om nukleïensuurafbraak te voorkom.

4. Aangesien verskillende amplikone verskillende benuttingsdoeltreffendheid as dUTP en sensitiwiteit vir UNG het, moet die reagense geoptimaliseer word indien die opsporingsensitiwiteit afneem wanneer UNG-stelsel gebruik word.Kontak ons ​​asseblief vir tegniese ondersteuning indien nodig.

5. Om amplifikasie van oordrag-PKR-produkte tussen eenstap-reaksies te vermy, word toegewyde eksperimentele area en pipet benodig vir amplifikasie.Werk met handskoene en verander gereeld en moenie die reaksiebuis na PCR-versterking oopmaak nie.