Ultra Nuclease
UltraNuclease is 'n geneties gemanipuleerde endonuklaese afgelei van Serratia marcescens, wat in staat is om DNA of RNA af te breek, óf dubbel- óf enkelstrengs, lineêr of sirkelvormig onder 'n wye reeks toestande, volledig afbreek nukleïensure in 5'-monofosfaat oligonukleotiede met 3-5 basislengte. .Na genetiese ingenieurswysiging is die produk gefermenteer, uitgedruk en gesuiwer in Escherichia coli (E. coli), wat die viskositeit van sel supernatant en sellysaat onwetenskaplike navorsing verminder, maar ook die suiweringsdoeltreffendheid en funksionele navorsing van proteïen verbeter.Dit kan ook gebruik word in die geenterapie, virussuiwering, entstofproduksie, proteïen- en polisakkaried farmaseutiese industrie as 'n gasheerresidu-nukleinsuurverwyderingsreagens.
Produk Funksies
| CAS No. | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Molekulêre gewig | 30kDa |
| Iso-elektriese punt | 6,85 |
| Proteïen suiwerheid | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Spesifieke aktiwiteit | ≥1.1×106U/mg |
| Optimale temperatuur | 37°C |
| Optimale pH | 8.0 |
| Protease-aktiwiteit | negatief |
| Biolas | ＜10CFU/100,000E |
| Residuele Gasheersel-proteïen | ≤10 dpm |
| Swaarmetaal | ≤10 dpm |
| Bakteriese endotoksien | ＜0.25EU/1000U |
| Bergingsbuffer | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl ，50% gliserol |
Bergingstoestande
≤0°C vervoer；-25~-15°C Berging，2 jaar geldigheid (vermy vries-ontdooiing).
Eenheid Definisie
Die hoeveelheid ensiem wat gebruik word om die absorpsiewaarde van △A260 binne 30min by 37 °C met 1.0 te verander, pH 8.0, gelykstaande aan verteerde 37μg salmsperm-DNS deur in oligonukleotiede te sny, is gedefinieer as 'n aktiewe eenheid(U).
Kwaliteitsbeheer
Residuele Gasheersel-proteïen: ELISA-stel
•Protease Oorblyfsels: 250KU/mL UltraNuclease het gereageer met substraat vir 60min, geen aktiwiteit is opgespoor nie.
•Bakteriese endotoksien: LAL-toets, Farmakopee van die Volksrepubliek van China Volume 4 (2020-uitgawe) gellimiettoetsmetode.Algemene Reëls (1143).
•Biolading: Farmakopee van die Volksrepubliek China Volume 4 (2020-uitgawe)— Algemeen
Reëls vir Steriliteitstoets (1101), PRC Nasionale Standaard, GB 4789.2-2016.
•Swaarmetaal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operasie
UltraNuklease-aktiwiteit is aansienlik geïnhibeer wanneer SDS-konsentrasie meer as 0.1% of EDTA was
konsentrasie was meer as 1mM. Oppervlakaktiewe middel Triton X- 100, Tween 20 en Tween 80 het geen effek op nuklease gehad nie
eienskappe wanneer die konsentrasie onder 1,5% was.
| Operasie | Optimale werking | Geldige werking |
| Temperatuur | 37℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-merkapto-etanol | 0-100mM | >100mM |
| Eenwaardige metaalioon （Na+, K+ ens.) | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
Gebruik en Dosis
• Verwyder eksogene nukleïensuur uit entstofprodukte, verminder die risiko van oorblywende nukleïensuurtoksisiteit en verbeter produkveiligheid.
• Verminder die viskositeit van voervloeistof wat deur nukleïensuur veroorsaak word, verkort verwerkingstyd en verhoog proteïenopbrengs.
• Verwyder die nukleïensuur wat deeltjie toegedraai het (virus, insluitingsliggaam, ens.), wat bevorderlik is
tot die vrystelling en suiwering van die deeltjie.
| Eksperimentele tipe | Proteïenproduksie | Virus, entstof | Seldwelms |
| Selle nommer | 1g sel nat gewig (hersuspendeer met 10ml buffer) | 1L fermentasie vloeibare supernatant | 1L kultuur |
| Minimum Dosis | 250U | 100U | 100U |
| Aanbevole dosis | 2500U | 25 000 U | 5000U |
• Nukleasebehandeling kan die resolusie en herstel van die monster verbeter vir kolomchromatografie, elektroforese en kladontleding.
• In geenterapie word nukleïensuur verwyder om gesuiwerde adeno-geassosieerde virusse te verkry.
