Fosfatase alkalies (ALP)
Beskrywing
Alkaliese fosfatase is afkomstig van 'n rekombinante E. coli-stam wat die TAB5-geen dra.Die ensiem kataliseer die defosforilering van 5´- en 3´-ente van DNA- en RNA-fosfomonoesters.Dit hidroliseer ook ribose, sowel as deoksiribonukleosiedtrifosfate (NTP's en dNTP's).TAB5 Alkaliese fosfatase werk op 5' uitstaande, 5' ingeboude en stomp punte.Die fosfatase kan in baie molekulêre biologie toepassings gebruik word, soos kloning of sonde-eindetikettering om die gefosforileerde punte van DNA of RNA te verwyder.In kloningseksperimente verhoed defosforilering die gelineariseerde plasmied-DNS van selfligasie.Dit kan ook nie-geïnkorporeerde dNTP's in PCR-reaksies afbreek om 'n sjabloon vir DNA-volgordebepaling voor te berei.Die ensiem word heeltemal en onomkeerbaar geïnaktiveer deur vir 5 minute by 70°C te verhit, waardeur die verwydering van die fosfatase voor afbinding of eindetikettering onnodig word.
Gebruik
1.Alkaliese fosfatase gekoppel aan proteïene (teenliggaampies, streptavidien ens.) kan spesifiek teikenmolekules identifiseer, en kan gebruik word in ELISA, WB en histochemiese opsporing;
2.Alkaliese fosfatase kan gebruik word om die 5'-terminaal van DNA of RNA te defosforiseer om selfkoppeling te voorkom;
3. Bogenoemde gedefosforileerde DNA of RNA kan gemerk word deur radio-gemerkte fosfate (via T4 poli-nukleotied kinase)
Chemiese struktuur
Spesifikasie
Toets items | Spesifikasies |
Ensiemaktiwiteit | 5U/μL |
Endonuklease aktiwiteit | Nie bespeur nie |
Eksonuuklease-aktiwiteit | Nie bespeur nie |
Nicking-aktiwiteit | Nie bespeur nie |
RNase-aktiwiteit | Nie bespeur nie |
E.coli DNA | ≤1 kopie/5U |
Endotoksien | LAL-toets, ≤10EU/mg |
Reinheid | ≥95% |
Vervoer en berging
Vervoer:AmbIent
Berging:Berg by 2-8°C
Hertoets word aanbeveelLewe:2 jaar