DNase I
DNase I (Deoksiribonuklease I) is 'n endodeoksiribonuklease wat enkel- of dubbelstring-DNS kan verteer.Dit herken en klief fosfodiesterbindings om monodeoksinukleotiede of enkel- of dubbelstring oligodeoksinukleotiede te produseer met fosfaatgroepe by die 5'-terminaal en hidroksiel by die 3'-terminaal.Die aktiwiteit van DNase I hang af van Ca2+ en kan deur tweewaardige metaalione soos Mn2+ en Zn2+ geaktiveer word.5mM Ca2+ beskerm die ensiem teen hidrolise.In die teenwoordigheid van Mg2+ kon die ensiem enige plek op enige DNA-string lukraak herken en kloof.In die teenwoordigheid van Mn2+ kan die dubbele DNA-stringe gelyktydig herken en op byna dieselfde plek gekloof word om plat-end-DNA-fragmente of taai-end-DNS-fragmente te vorm met 1-2 nukleotiede wat uitsteek.
Produk Eiendom
Beespankreas DNase I is in gisuitdrukkingstelsel uitgedruk en gesuiwer.
Componente
| Komponent | Volume | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-vry | 20μL | 200μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I Buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Vervoer en berging
1. Bergingsstabiliteit: – 15℃~-25℃ vir berging;
2.Vervoerstabiliteit: Vervoer onder yspakke;
3. Verskaf in: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserol, pH 7.6 by 25℃.
Eenheid Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid ensiem wat 1 µg pBR322 DNA in 10 minute by 37°C heeltemal sal afbreek.
Kwaliteitsbeheer
RNase:5U van DNase I met 1.6 μg MS2 RNA vir 4 uur by 37 ℃ lewer geen degradasie soos bepaal deur agarose gel elektroforese nie.
Bakteries Endotoksien:LAL-toets, volgens Chinese Pharmacopoeia IV 2020-uitgawe, gellimiettoetsmetode, algemene reël (1143).Bakteriële endotoksieninhoud moet ≤10 EU/mg wees.
Aanwysings
1. Berei die reaksie-oplossing in die RNase-vrye buis voor volgens die verhoudings hieronder gelys:
| Komponent | Volume |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I Buffer | 1 μL |
| DNase I, RNase-vry (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Tot 10 μL |
2,37 ℃ vir 15 minute;
3. Voeg die terminasiebuffer by om die reaksie te stop en verhit by 65℃ vir 10 minute om DNase I te deaktiveer. Die monster kan direk vir die volgende transkripsie-eksperiment gebruik word.
Notas
1.Gebruik 1U DNase I per μg RNA, of 1U DNase I vir minder as 1μg RNA.
2.EDTA moet bygevoeg word tot 'n finale konsentrasie van 5 mM om RNA te beskerm teen afgebreek tydens ensiem inaktivering.
